由江蘇昆山檢驗(yàn)檢疫局和南京農(nóng)業(yè)大學(xué)共同申請(qǐng)的“雪松疫霉根腐病菌快速分子檢測(cè)技術(shù)研究”課題日前通過(guò)專家鑒定。該研究以tRNA序列為靶點(diǎn)，首次應(yīng)用于卵菌的鑒定，并建立了一套快速、靈敏、高效的基于PCR檢測(cè)雪松疫霉根腐病菌的方法，該研究對(duì)從GenBank中得到P.lateralis和其他疫霉種的tRNA序列進(jìn)行分析，設(shè)計(jì)了一對(duì)特異性引物T1/T2，利用該引物對(duì)其他15種疫霉和其他真菌進(jìn)行特異性擴(kuò)增，發(fā)現(xiàn)只能從P.lateralis中擴(kuò)增得到一條192bp的條帶，其他菌株均無(wú)擴(kuò)增條帶出現(xiàn)，表明該對(duì)引物具有種的特異性。
在25μL反應(yīng)體系中，普通的PCR方法能檢測(cè)到10pg P. lateralis基因組DNA，而該研究的體系中采用套式PCR技術(shù)將檢測(cè)P.lateralis基因組DNA的靈敏度提高到了1fg，效率提高了1萬(wàn)倍，這對(duì)于靶標(biāo)病原物的量非常低或存在PCR抑制物時(shí)非常重要。這表明該研究設(shè)計(jì)的引物具有很高的靈敏度。對(duì)發(fā)病植株進(jìn)行檢測(cè)時(shí)，結(jié)合簡(jiǎn)單的DNA提取方法使用特異引物T1/T2進(jìn)行PCR擴(kuò)增，一個(gè)工作日就可以判斷植物是否被P.lateralis侵染。使用NaOH裂解法可以在30分鐘之內(nèi)即可得到病組織中病原菌的DNA用于PCR擴(kuò)增，而使用傳統(tǒng)的方法檢測(cè)至少需要兩周，檢測(cè)時(shí)間大大縮短。
該研究建立的雪松疫霉根腐病菌檢測(cè)方法具有準(zhǔn)確、快速、簡(jiǎn)單易操作等優(yōu)點(diǎn)，可以在病害侵染初期鑒定出病原物，可參考應(yīng)用于出入境植物和植物產(chǎn)品的檢驗(yàn)檢疫及田間調(diào)查，對(duì)控制雪松疫霉根腐病菌傳入我國(guó)具有重要意義。同時(shí)，該方法的建立也為其他病原菌的檢測(cè)提供了技術(shù)指導(dǎo)和理論依據(jù)。
（紀(jì) 睿）
《中國(guó)國(guó)門時(shí)報(bào)》
